Ви благодариме што ја посетивте страницата nature.com. Верзијата на прелистувачот што ја користите има ограничена поддршка за CSS. За најдобро искуство, препорачуваме да ја користите најновата верзија на прелистувачот (или да го исклучите режимот на компатибилност во Internet Explorer). Дополнително, за да се обезбеди континуирана поддршка, оваа страница нема да вклучува стилови или JavaScript.
Меламинот е препознаен загадувач на храна кој може да биде присутен во одредени категории на храна и случајно и намерно. Целта на ова истражување беше да се потврди откривањето и квантификацијата на меламин во формула за новороденчиња и млеко во прав. Анализирани се вкупно 40 комерцијално достапни примероци од храна, вклучувајќи формула за новороденчиња и млеко во прав, од различни региони на Иран. Приближната содржина на меламин во примероците беше одредена со помош на систем за високо-перформансна течна хроматографија-ултравиолетово (HPLC-UV). Конструирана е калибрациска крива (R2 = 0,9925) за откривање на меламин во опсег од 0,1–1,2 μg mL−1. Границите на квантификација и детекција беа 1 μg mL−1 и 3 μg mL−1, соодветно. Меламинот беше тестиран во формула за новороденчиња и млеко во прав, а резултатите покажаа дека нивоата на меламин во примероците од формула за новороденчиња и млеко во прав беа 0,001–0,095 mg kg−1 и 0,001–0,004 mg kg−1, соодветно. Овие вредности се во согласност со законодавството на ЕУ и Codex Alimentarius. Важно е да се напомене дека консумирањето на овие млечни производи со намалена содржина на меламин не претставува значителен ризик за здравјето на потрошувачите. Ова е поткрепено и со резултатите од проценката на ризикот.
Меламинот е органско соединение со молекуларна формула C3H6N6, добиено од цијанамид. Има многу ниска растворливост во вода и е приближно 66% азот. Меламинот е широко користено индустриско соединение со широк спектар на легитимни употреби во производството на пластика, ѓубрива и опрема за преработка на храна (вклучувајќи пакување храна и кујнски прибор)1,2. Меламинот се користи и како носач на лекови за лекување на болести. Високиот процент на азот во меламинот може да доведе до злоупотреба на соединението и пренесување на својствата на протеинските молекули на состојките на храната3,4. Затоа, додавањето меламин во прехранбените производи, вклучувајќи ги и млечните производи, ја зголемува содржината на азот. Така, погрешно е заклучено дека содржината на протеини во млекото е поголема отколку што всушност била.
За секој додаден грам меламин, содржината на протеини во храната ќе се зголеми за 0,4%. Сепак, меламинот е високо растворлив во вода и може да предизвика посериозна штета. Додавањето 1,3 грама меламин во течни производи како што е млекото може да ја зголеми содржината на протеини во млекото за 30%5,6. Иако меламинот се додава во храна од животинско, па дури и во човечка храна за да се зголеми содржината на протеини7, Комисијата на Codex Alimentarius (CAC) и националните власти не го одобрија меламинот како додаток во исхраната и го наведоа како опасен ако се проголта, вдиши или апсорбира преку кожата. Во 2012 година, Меѓународната агенција за истражување на ракот на Светската здравствена организација (СЗО) го наведе меламинот како канцероген од класа 2Б бидејќи може да биде штетен за здравјето на луѓето8. Долгорочната изложеност на меламин може да предизвика рак или оштетување на бубрезите2. Меламинот во храната може да се соедини со цијанурска киселина за да формира жолти кристали нерастворливи во вода кои можат да предизвикаат оштетување на ткивото на бубрезите и мочниот меур, како и рак на уринарниот тракт и губење на тежината9,10. Може да предизвика акутно труење со храна, а во високи концентрации и смрт, особено кај доенчиња и мали деца.11 Светската здравствена организација (СЗО), исто така, го утврди толерантниот дневен внес (TDI) на меламин за луѓето на 0,2 mg/kg телесна тежина дневно, врз основа на упатствата на CAC.12 Администрацијата за храна и лекови на САД (US FDA) го утврди максималното ниво на остатоци од меламин на 1 mg/kg во формулата за новороденчиња и 2,5 mg/kg во друга храна.2,7 Во септември 2008 година, беше објавено дека неколку домашни производители на формула за новороденчиња додале меламин во млеко во прав за да ја зголемат содржината на протеини во нивните производи, што резултираше со труење со млеко во прав и предизвика национален инцидент со труење со меламин во кој се разболеа повеќе од 294.000 деца, а повеќе од 50.000 беа хоспитализирани.13
Доењето не е секогаш можно поради различни фактори како што се тешкотиите во градскиот живот, болеста на мајката или детето, што доведува до употреба на формула за доенчиња за хранење на доенчиња. Како резултат на тоа, се основани фабрики за производство на формула за доенчиња која е што е можно поблиска до мајчиното млеко по состав14. Формулата за доенчиња што се продава на пазарот обично се прави од кравјо млеко и обично се прави со специјална мешавина од масти, протеини, јаглехидрати, витамини, минерали и други соединенија. За да биде блиска до мајчиното млеко, содржината на протеини и масти во формулата варира, а во зависност од видот на млеко, тие се збогатуваат со соединенија како што се витамини и минерали како што е железо15. Бидејќи доенчињата се чувствителна група и постои ризик од труење, безбедноста на консумирањето млеко во прав е од витално значење за здравјето. По случајот со труење со меламин кај кинеските доенчиња, земјите ширум светот посветија големо внимание на ова прашање, а чувствителноста на оваа област исто така се зголеми. Затоа, особено е важно да се зајакне контролата врз производството на формула за доенчиња со цел да се заштити здравјето на доенчињата. Постојат различни методи за откривање на меламин во храната, вклучувајќи високо-перформансна течна хроматографија (HPLC), електрофореза, сензорен метод, спектрофотометрија и ензимски поврзан имуносорбентен тест со антиген-антитело16. Во 2007 година, Администрацијата за храна и лекови на САД (FDA) разви и објави HPLC метод за одредување на меламин и цијанурска киселина во храната, што е најефикасниот метод за одредување на содржината на меламин17.
Концентрациите на меламин во формулата за новороденчиња, мерени со нова техника на инфрацрвена спектроскопија, се движеа од 0,33 до 0,96 милиграми на килограм (mg kg-1).18 Една студија во Шри Ланка покажа дека нивоата на меламин во полномасното млеко во прав се движат од 0,39 до 0,84 mg kg-1. Покрај тоа, увезените примероци од формула за новороденчиња содржеа највисоки нивоа на меламин, од 0,96 и 0,94 mg/kg, соодветно. Овие нивоа се под регулаторната граница (1 mg/kg), но потребна е програма за следење за безбедноста на потрошувачите.19
Неколку студии ги испитувале нивоата на меламин во иранските формули за новороденчиња. Околу 65% од примероците содржеле меламин, со просек од 0,73 мг/кг и максимум од 3,63 мг/кг. Друга студија покажала дека нивото на меламин во формулите за новороденчиња се движи од 0,35 до 3,40 μg/кг, со просек од 1,38 μg/кг. Генерално, присуството и нивото на меламин во иранските формули за новороденчиња се оценети во различни студии, при што некои примероци содржат меламин што ја надминува максималната граница утврдена од регулаторните органи (2,5 мг/кг/храна).
Со оглед на огромната директна и индиректна потрошувачка на млеко во прав во прехранбената индустрија и посебното значење на формулата за новороденчиња во хранењето на децата, оваа студија имаше за цел да го потврди методот на детекција на меламин во млекото во прав и формулата за новороденчиња. Всушност, првата цел на оваа студија беше да се развие брз, едноставен и прецизен квантитативен метод за откривање на фалсификување на меламин во формулата за новороденчиња и млекото во прав со употреба на високо-перформансна течна хроматографија (HPLC) и ултравиолетова (UV) детекција; Второ, целта на оваа студија беше да се утврди содржината на меламин во формулата за новороденчиња и млекото во прав што се продаваат на иранскиот пазар.
Инструментите што се користат за анализа на меламин варираат во зависност од локацијата на производство на храна. За мерење на остатоци од меламин во млекото и формулата за новороденчиња беше користен чувствителен и сигурен метод на HPLC-UV анализа. Млечните производи содржат различни протеини и масти што можат да влијаат на мерењето на меламинот. Затоа, како што е наведено од Sun et al. 22, неопходна е соодветна и ефикасна стратегија за чистење пред инструменталната анализа. Во оваа студија, користевме филтри за шприц за еднократна употреба. Во оваа студија, користевме колона C18 за да го одвоиме меламинот во формулата за новороденчиња и млекото во прав. Слика 1 го прикажува хроматограмот за детекција на меламин. Покрај тоа, обновувањето на примероците што содржат 0,1–1,2 mg/kg меламин се движеше од 95% до 109%, равенката на регресија беше y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), а вредностите на релативната стандардна девијација (RSD) се движеа од 0,8 до 2%. Достапните податоци укажуваат дека методот е сигурен во проучуваниот опсег на концентрација (Табела 1). Инструменталната граница на детекција (LOD) и границата на квантификација (LOQ) на меламин беа 1 μg mL−1 и 3 μg mL−1, соодветно. Покрај тоа, UV спектарот на меламин покажа апсорпционен опсег на 242 nm. Методот на детекција е чувствителен, сигурен и прецизен. Овој метод може да се користи за рутинско одредување на нивото на меламин.
Слични резултати се објавени од неколку автори. За анализа на меламин во млечни производи е развиен метод со високо-перформансна течна хроматографија - фотодиоден низ (HPLC). Долните граници на квантификација беа 340 μg kg−1 за млеко во прав и 280 μg kg−1 за формула за новороденчиња на 240 nm. Филаци и сор. (2012) објавија дека меламинот не е откриен во формулата за новороденчиња со HPLC. Сепак, 8% од примероците од млеко во прав содржеле меламин на ниво од 0,505–0,86 mg/kg. Титлмиет и сор.23 спроведоа слична студија и ја утврдија содржината на меламин во формулата за новороденчиња (број на примерок: 72) со високо-перформансна течна хроматографија - масена спектрометрија/MS (HPLC-MS/MS) на приближно 0,0431–0,346 mg kg−1. Во студија спроведена од Венкасами и сор. (2010), пристапот на зелена хемија (без ацетонитрил) и обратнофазната високо-перформансна течна хроматографија (RP-HPLC) беа користени за проценка на меламинот во формулата за новороденчиња и млекото. Опсегот на концентрација на примерокот беше од 1,0 до 80 g/mL, а одговорот беше линеарен (r > 0,999). Методот покажа обновување од 97,2–101,2 во опсегот на концентрација од 5–40 g/mL, а репродуктивноста беше помала од 1,0% релативна стандардна девијација. Понатаму, набљудуваните LOD и LOQ беа 0,1 g mL−1 и 0,2 g mL−124, соодветно. Lutter et al. (2011) ја утврдија контаминацијата со меламин во кравјо млеко и формула за новороденчиња на база на млеко користејќи HPLC-UV. Концентрациите на меламин се движеа од < 0,2 до 2,52 mg kg−1. Линеарниот динамички опсег на HPLC-UV методот беше од 0,05 до 2,5 mg kg−1 за кравјо млеко, 0,13 до 6,25 mg kg−1 за формула за новороденчиња со масена фракција на протеини од <15% и од 0,25 до 12,5 mg kg−1 за формула за новороденчиња со масена фракција на протеини од 15%. Резултатите од LOD (и LOQ) беа 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) за кравјо млеко, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) за формула за новороденчиња <15% протеини и 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) за формула за новороденчиња со 15% протеини, со однос сигнал-шум од 3 и 1025 за LOD и LOQ, соодветно. Diebes et al. (2012) ги истражуваа нивоата на меламин во примероци од формула за новороденчиња и млеко во прав користејќи HPLC/DMD. Во формулата за доенчиња, најниските и највисоките нивоа беа 9,49 mg kg−1 и 258 mg kg−1, соодветно. Границата на детекција (LOD) беше 0,05 mg kg−1.
Џаваид и сор. објавија дека остатоците од меламин во формулата за новороденчиња се во опсег од 0,002–2 mg kg−1 со помош на инфрацрвена спектроскопија со Фуриеова трансформација (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Резаи и сор.27 предложија HPLC-DDA метод (λ = 220 nm) за проценка на меламинот и постигнаа LOQ од 0,08 μg mL−1 за млеко во прав, што беше пониско од нивото добиено во оваа студија. Сун и сор. развија RP-HPLC-DAD за детекција на меламин во течно млеко со екстракција во цврста фаза (SPE). Тие добија LOD и LOQ од 18 и 60 μg kg−128, соодветно, што е почувствително од тековната студија. Монтесано и сор. ја потврди ефикасноста на методот HPLC-DMD за проценка на содржината на меламин во протеинските додатоци со ограничување на квантификација од 0,05–3 mg/kg, што беше помалку чувствително од методот што се користеше во оваа студија29.
Несомнено, аналитичките лаборатории играат важна улога во заштитата на животната средина преку следење на загадувачите во различни примероци. Сепак, употребата на голем број реагенси и растворувачи за време на анализата може да резултира со формирање на опасни остатоци. Затоа, зелената аналитичка хемија (GAC) беше развиена во 2000 година за да се намалат или елиминираат негативните ефекти од аналитичките процедури врз операторите и животната средина26. Традиционалните методи за детекција на меламин, вклучувајќи хроматографија, електрофореза, капиларна електрофореза и ензимски поврзан имуносорбентен тест (ELISA), се користат за идентификување на меламин. Сепак, меѓу бројните методи за детекција, електрохемиските сензори привлекоа големо внимание поради нивната одлична чувствителност, селективност, брзо време на анализа и лесни за користење карактеристики30,31. Зелената нанотехнологија користи биолошки патишта за синтеза на наноматеријали, што може да го намали создавањето на опасен отпад и потрошувачката на енергија, со што се промовира имплементацијата на одржливи практики. Нанокомпозитите, на пример, направени од еколошки материјали, може да се користат во биосензори за детекција на супстанции како што е меламин32,33,34.
Студијата покажува дека микроекстракцијата во цврста фаза (SPME) се користи ефикасно поради нејзината поголема енергетска ефикасност и одржливост во споредба со традиционалните методи на екстракција. Еколошката пристојност и енергетската ефикасност на SPME ја прават одлична алтернатива на традиционалните методи на екстракција во аналитичката хемија и обезбедуваат поодржлив и поефикасен метод за подготовка на примероци35.
Во 2013 година, Ву и сор. развија високо чувствителен и селективен биосензор за површинска плазмонска резонанца (мини-SPR) кој го користи спојувањето помеѓу меламин и антитела против меламин за брзо откривање на меламин во формула за новороденчиња со помош на имунотест. SPR биосензорот во комбинација со имунотест (користејќи меламин-конјугиран говедски серумски албумин) е лесна за употреба и ефтина технологија со граница на детекција од само 0,02 μg mL-136.
Насири и Абасијан користеле пренослив сензор со висок потенцијал во комбинација со композити од графен оксид-хитозан (GOCS) за да детектираат меламин во комерцијални примероци37. Овој метод покажал ултра висока селективност, точност и одговор. Сензорот GOCS покажал извонредна чувствителност (239,1 μM−1), линеарен опсег од 0,01 до 200 μM, константа на афинитет од 1,73 × 104 и LOD до 10 nM. Покрај тоа, студијата спроведена од Чандрасекар и сор. во 2024 година усвоила еколошки и економичен пристап. Тие користеле екстракт од кора од папаја како редукционо средство за синтеза на наночестички од цинк оксид (ZnO-NPs) на еколошки метод. Последователно, била развиена единствена техника на микро-Раманова спектроскопија за одредување на меламин во формула за новороденчиња. ZnO-NPs добиени од земјоделски отпад покажале потенцијал како вредна дијагностичка алатка и сигурна, нискобуџетна технологија за следење и детектирање на меламин38.
Ализаде и сор. (2024) користеле високо чувствителна флуоресцентна платформа од метално-органска рамка (MOF) за да го одредат меламинот во млекото во прав. Линеарниот опсег и долната граница на детекција на сензорот, одредени со користење на 3σ/S, биле од 40 до 396,45 nM (еквивалентно на 25 μg kg−1 до 0,25 mg kg−1) и 40 nM (еквивалентно на 25 μg kg−1), соодветно. Овој опсег е далеку под максималните нивоа на остатоци (MRLs) поставени за идентификација на меламин во формула за новороденчиња (1 mg kg−1) и други примероци од храна/добивка (2,5 mg kg−1). Флуоресцентниот сензор (тербиум (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) покажал поголема точност и попрецизна способност за мерење од HPLC39 во откривањето на меламин во млекото во прав. Биосензорите и нанокомпозитите во зелената хемија не само што ги подобруваат можностите за детекција, туку и ги минимизираат еколошките опасности во согласност со принципите на одржлив развој.
Принципите на зелената хемија се применети во различни методи за одредување на меламин. Еден пристап е развој на метод на зелена дисперзивна микроекстракција во цврста фаза со користење на природен поларен полимер β-циклодекстрин вкрстено поврзан со лимонска киселина за ефикасна екстракција на меламин 40 од примероци како што се формула за новороденчиња и топла вода. Друг метод ја користи Маниховата реакција за одредување на меламин во примероци од млеко. Овој метод е ефтин, еколошки и многу точен со линеарен опсег од 0,1–2,5 ppm и ниска граница на детекција 41. Понатаму, развиен е економичен и еколошки метод за квантитативно одредување на меламин во течно млеко и формула за новороденчиња со користење на инфрацрвена трансмисиона спектроскопија со Фуриеова трансформација со висока точност и граници на детекција од 1 ppm и 3,5 ppm, соодветно 42. Овие методи ја демонстрираат примената на принципите на зелената хемија во развојот на ефикасни и одржливи методи за одредување на меламин.
Неколку студии предложија иновативни методи за детекција на меламин, како што се употребата на екстракција во цврста фаза и високо-перформансна течна хроматографија (HPLC)43, како и брза високо-перформансна течна хроматографија (HPLC), која не бара сложена претходна обработка или реагенси со јонски парови, со што се намалува количината на хемиски отпад44. Овие методи не само што даваат точни резултати за одредување на меламин во млечните производи, туку се и во согласност со принципите на зелената хемија, минимизирајќи ја употребата на опасни хемикалии и намалувајќи го целокупното влијание на аналитичкиот процес врз животната средина.
Четириесет примероци од различни марки беа тестирани во три примероци, а резултатите се прикажани во Табела 2. Нивоата на меламин во примероците од формула за новороденчиња и млеко во прав се движеа од 0,001 до 0,004 mg/kg и од 0,001 до 0,095 mg/kg, соодветно. Не се забележани значајни промени помеѓу трите возрасни групи на формула за новороденчиња. Покрај тоа, меламин беше откриен во 80% од млекото во прав, но 65% од формулите за новороденчиња беа контаминирани со меламин.
Содржината на меламин во индустриското млеко во прав беше поголема отколку во формулата за новороденчиња, а разликата беше значајна (p <0,05) (Слика 2).
Добиените резултати беа под границите утврдени од FDA (под 1 и 2,5 mg/kg). Покрај тоа, резултатите се во согласност со границите утврдени од CAC (2010) и EU45,46, односно максималната дозволена граница е 1 mg kg-1 за формула за доенчиња и 2,5 mg kg-1 за млечни производи.
Според студијата од 2023 година од Ганати и сор.47, содржината на меламин во различни видови пакувано млеко во Иран се движела од 50,7 до 790 μg kg−1. Нивните резултати биле под дозволената граница на FDA. Нашите резултати се пониски од оние на Шодер и сор.48 и Рима и сор.49. Шодер и сор. (2010) откриле дека нивоата на меламин во млекото во прав (n=49) утврдени со ELISA се движеле од 0,5 до 5,5 mg/kg. Рима и сор. анализирале остатоци од меламин во млекото во прав со флуоресцентна спектрофотометрија и откриле дека содржината на меламин во млекото во прав била 0,72–5,76 mg/kg. Во Канада беше спроведена студија во 2011 година за следење на нивоата на меламин во формулата за новороденчиња (n=94) со употреба на течна хроматографија (LC/MS). Концентрациите на меламин биле под прифатливата граница (прелиминарен стандард: 0,5 mg kg−1). Малку е веројатно дека откриените лажни нивоа на меламин биле тактика што се користела за зголемување на содржината на протеини. Сепак, тоа не може да се објасни со употреба на ѓубрива, преместување на содржината на садот или слични фактори. Понатаму, изворот на меламин во млекото во прав увезено во Канада не бил откриен50.
Хасани и сор. ја измериле содржината на меламин во млеко во прав и течно млеко на иранскиот пазар во 2013 година и пронашле слични резултати. Резултатите покажале дека освен една марка млеко во прав и течно млеко, сите други примероци биле контаминирани со меламин, со нивоа кои се движеле од 1,50 до 30,32 μg g−1 во млеко во прав и 0,11 до 1,48 μg ml−1 во млеко. Имено, цијанурска киселина не била откриена во ниту еден од примероците, што ја намалува можноста за труење со меламин кај потрошувачите. 51 Претходни студии ја процениле концентрацијата на меламин во чоколадни производи што содржат млеко во прав. Околу 94% од увезените примероци и 77% од иранските примероци содржеле меламин. Нивоата на меламин во увезените примероци се движеле од 0,032 до 2,692 mg/kg, додека оние во иранските примероци се движеле од 0,013 до 2,600 mg/kg. Генерално, меламин е откриен во 85% од примероците, но само една специфична марка имала нивоа над дозволената граница.44 Титлмиер и сор. известиле за нивоа на меламин во млеко во прав кои се движат од 0,00528 до 0,0122 mg/kg.
Табела 3 ги сумира резултатите од проценката на ризикот за трите возрасни групи. Ризикот бил помал од 1 во сите возрасни групи. Според тоа, не постои неканцероген здравствен ризик од меламин во формулата за доенчиња.
Пониските нивоа на контаминација кај млечните производи може да се должат на ненамерна контаминација за време на подготовката, додека повисоките нивоа може да се должат на намерни додатоци. Понатаму, вкупниот ризик за здравјето на луѓето од консумирање млечни производи со ниски нивоа на меламин се смета за низок. Може да се заклучи дека консумирањето производи што содржат толку ниски нивоа на меламин не претставува никаков ризик за здравјето на потрошувачите52.
Со оглед на важноста на управувањето со безбедноста на храната во млечната индустрија, особено во однос на заштитата на јавното здравје, од најголема важност е да се развие и валидира метод за проценка и споредување на нивоата и остатоците од меламин во млекото во прав и формулата за новороденчиња. Развиен е едноставен и точен HPLC-UV спектрофотометриски метод за одредување на меламин во формулата за новороденчиња и млекото во прав. Методот е валидиран за да се обезбеди неговата сигурност и точност. Границите на детекција и квантификација на методот се покажаа како доволно чувствителни за мерење на нивоата на меламин во формулата за новороденчиња и млекото во прав. Според нашите податоци, меламин е откриен во повеќето ирански примероци. Сите откриени нивоа на меламин беа под максимално дозволените граници утврдени од CAC, што укажува дека потрошувачката на овие видови млечни производи не претставува ризик за здравјето на луѓето.
Сите употребени хемиски реагенси беа од аналитичка чистота: меламин (2,4,6-триамино-1,3,5-триазин) 99% чист (Sigma-Aldrich, Сент Луис, Мисури); ацетонитрил со HPLC квалитет (Merck, Дармштат, Германија); ултрачиста вода (Millipore, Morfheim, Франција). Филтри за шприц за еднократна употреба (Chromafil Xtra PVDF-45/25, големина на порите 0,45 μm, дијаметар на мембраната 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Германија).
За подготовка на примероците беа користени ултразвучна бања (Елма, Германија), центрифуга (Бекман Култер, Крефелд, Германија) и HPLC (KNAUER, Германија).
Користен е високо-перформансен течен хроматограф (KNAUER, Германија) опремен со UV детектор. Условите за HPLC анализа беа следниве: користен е UHPLC Ultimate систем опремен со аналитичка колона ODS-3 C18 (4,6 mm × 250 mm, големина на честички 5 μm) (MZ, Германија). HPLC елуентот (мобилна фаза) беше мешавина од TFA/метанол (450:50 mL) со брзина на проток од 1 mL min-1. Брановата должина на детекција беше 242 nm. Волуменот на инјектирање беше 100 μL, температурата на колоната беше 20 °C. Бидејќи времето на задржување на лекот е долго (15 минути), следната инјекција треба да се направи по 25 минути. Меламинот е идентификуван со споредување на времето на задржување и врвот на UV спектарот на меламинските стандарди.
Стандарден раствор на меламин (10 μg/mL) беше подготвен со вода и складиран во фрижидер (4 °C) подалеку од светлина. Разредете го основниот раствор со мобилната фаза и подгответе работни стандардни раствори. Секој стандарден раствор беше инјектиран во HPLC 7 пати. Калибрациската равенка 10 беше пресметана со регресивна анализа на одредената површина на пикот и одредената концентрација.
Комерцијално достапно кравјо млеко во прав (20 примероци) и примероци од различни марки на формула за новороденчиња на база на кравјо млеко (20 примероци) беа купени од локалните супермаркети и аптеки во Иран за хранење доенчиња од различни возрасни групи (0–6 месеци, 6–12 месеци и >12 месеци) и складирани на температура во фрижидер (4 °C) до анализата. Потоа, 1 ± 0,01 g хомогенизирано млеко во прав беше измерено и измешано со ацетонитрил:вода (50:50, v/v; 5 mL). Смесата беше мешана 1 минута, потоа сонифицирана во ултразвучна бања 30 минути и конечно протресена 1 минута. Смесата потоа беше центрифугирана на 9000 × g 10 минути на собна температура, а супернатантот беше филтриран во шишенце за автосемплер од 2 ml со помош на филтер со шприц од 0,45 μm. Филтратот (250 μl) потоа беше измешан со вода (750 μl) и инјектиран во HPLC системот10,42.
За да го валидираме методот, ги утврдивме закрепнувањето, точноста, границата на детекција (LOD), границата на квантификација (LOQ) и прецизноста под оптимални услови. LOD беше дефиниран како содржина на примерокот со висина на врвот три пати поголема од основното ниво на шум. Од друга страна, содржината на примерокот со висина на врвот 10 пати поголема од односот сигнал-шум беше дефинирана како LOQ.
Одговорот на уредот беше определен со помош на калибрациска крива што се состои од седум точки на податоци. Користени се различни содржини на меламин (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 и 1,2). Беше определена линеарноста на постапката за пресметување на меламин. Дополнително, неколку различни нивоа на меламин беа додадени во слепите примероци. Калибрациската крива беше конструирана со континуирано инјектирање на 0,1–1,2 μg mL−1 стандарден раствор на меламин во примероци од формула за новороденчиња и млеко во прав, а нејзиниот R2 = 0,9925. Точноста беше оценета со повторување и репродуктивност на постапката и беше постигната со инјектирање примероци во првиот и трите последователни дена (во три примероци). Повторливоста на методот беше оценета со пресметување на RSD % за три различни концентрации на додаден меламин. Студии за обновување беа извршени за да се утврди прецизноста. Степенот на обновување со методот на екстракција беше пресметан на три нивоа на концентрација на меламин (0,1, 1,2, 2) во примероци од формула за доенчиња и суво млеко9,11,15.
Проценетиот дневен внес (EDI) беше определен со користење на следната формула: EDI = Ci × Cc/BW.
Каде што Ci е просечната содржина на меламин, Cc е потрошувачката на млеко, а BW е просечната тежина на децата.
Анализата на податоците беше извршена со користење на SPSS 24. Нормалноста беше тестирана со користење на Колмогоров-Смирнов тест; сите податоци беа непараметриски тестови (p = 0). Затоа, тестот Крускал-Валис и тестот Ман-Витни беа користени за да се утврдат значајни разлики меѓу групите.
Ингелфингер, помладиот. Меламин и неговото влијание врз глобалната контаминација на храната. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Линч, РА и др. Ефект на pH вредноста врз миграцијата на меламин во детските чинии. Меѓународен журнал за контаминација на храна, 2, 1–8 (2015).
Барет, МП и Гилберт, ИХ. Насочување на токсични соединенија кон внатрешноста на трипанозомите. Напредок во паразитологијата 63, 125–183 (2006).
Нирман, МФ, и др. Ин витро и ин виво евалуација на меламин дендримери како средства за испорака на лекови. Меѓународен журнал за фармација, 281(1–2), 129–132(2004).
Светска здравствена организација. Експертски состаноци 1–4 за преглед на токсиколошките аспекти на меламинот и цијануричната киселина (2008).
Хау, АК-Ц., Кван, ТХ и Ли, ПК-Т. Токсичност на меламин и бубрег. Весник на Американското здружение за нефрологија 20(2), 245–250 (2009).
Озтурк, С. и Демир, Н. Развој на нов IMAC адсорбент за идентификација на меламин во млечни производи со високоперформансна течна хроматографија (HPLC). Весник за синтеза и анализа на храна 100, 103931 (2021).
Чансуварн, В., Паник, С. и Имам, А. Едноставно спектрофотометриско одредување на меламин во течно млеко врз основа на реакцијата на Маних. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Деабс, М. и Ел-Хабиб, Р. Одредување на меламин во формула за новороденчиња, млеко во прав и примероци од пангасиус со HPLC/диодна низа хроматографија. Весник за аналитичка токсикологија на животната средина, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Скинер, КГ, Томас, ЈД и Остерлох, ЈД Токсичност на меламин. Весник за медицинска токсикологија, 6, 50–55 (2010).
Светска здравствена организација (СЗО), Токсикологија и здравствени аспекти на меламин и цијанурска киселина: Извештај од соработката на експертите на СЗО/ФАО поддржана од Здравство Канада, Отава, Канада, 1-4 декември 2008 година (2009).
Корма, СА, и др. Компаративна студија за составот на липидите и квалитетот на формулата во прав за новороденчиња што содржи нови функционални структурни липиди и комерцијалната формула за новороденчиња. Европски истражувачки и технолошки истражувања за храна 246, 2569–2586 (2020).
Ел-Васиф, М. и Хашем, Х. Зголемување на хранливата вредност, квалитетните атрибути и рокот на траење на формулата за новороденчиња со палмино масло. Блискоисточен журнал за земјоделски истражувања 6, 274–281 (2017).
Јин, В., и др. Производство на моноклонални антитела против меламин и развој на индиректен конкурентен ELISA метод за откривање на меламин во сурово млеко, млеко во прав и храна за животни. Весник за земјоделска и прехранбена хемија 58(14), 8152–8157 (2010).